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人子宮頸鱗癌細胞SiHa貼壁細胞接收后的操作流程與注意事項

更新時間:2023-02-07 點擊量:948
  人子宮頸鱗癌細胞SiHa貼壁細胞接收后的操作流程與注意事項:
  
  1.收到細胞當(dāng)天盡快更換新鮮培養(yǎng)基,第二天再進行消化處理
  
  2.如果細胞收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài),請將懸浮的細胞即時離心,加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)觀察。同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的培養(yǎng)基,培養(yǎng)觀察
  
  3.若出現(xiàn)生長不均:貼壁細胞若出現(xiàn)分布不均,成島狀生長,可將細胞進行消化,重懸打散細胞,加入新鮮培養(yǎng)基進行培養(yǎng)
  
  人子宮頸鱗癌細胞SiHa貼壁細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程(請嚴(yán)格遵照無菌操作):
  
  1.吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS緩沖液潤洗細胞兩次,加適量0.25%胰酶進行消化細胞(注意把握消化時間)
  
  2.鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂?。┤サ粢让福?~8ml培養(yǎng)基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散
  
  3.取部分細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
  
  4.注意培養(yǎng)基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細胞密度達到80%以后重復(fù)1項作或者凍存
  
  人子宮頸鱗癌細胞SiHa的傳代方法:
  
  1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基;
  
  2.加3-4ml常溫PBS輕輕潤洗細胞10-20s,吸走潤洗的PBS;
  
  3.T25瓶加1ml左右胰酶,輕輕晃動培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細胞層;
  
  4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化;
  
  5.消化到細胞間隙變大,但未脫落時加2-3ml培養(yǎng)基終止胰酶消化;
  
  6.混勻細胞,900rpm離心3-5min,棄上清;
  
  7.加新的培養(yǎng)基輕輕重懸細胞,均勻分到新的培養(yǎng)瓶里;
  
  8.補足培養(yǎng)基,將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng);